Sickle cell anemia: hierarchical cluster analysis and clinical profile in a cohort in Brazil

Abstract Introduction Sickle cell anemia is a monogenic disorder caused by a mutation in the β-hemoglobin gene, resulting in sickle hemoglobin that can polymerize. Presentation and clinical course have significant inter-individual variability and classifying these patients for severity is a challenge. Methods We applied hierarchical clusters with 10 routine laboratory tests to understand if this grouping could be associated with clinical manifestations. We included 145 adult homozygous patients (SS) at an outpatient clinic in a retrospective study. Results We found five clusters by counting those that had been differentiated by unconjugated bilirubin, reticulocytes, LDH, leukocytes, lymphocytes and monocytes. When comparing groups to clinical findings, the clusters were different only for liver abnormality. Cluster 3 had the lower median of reticulocytes, LDH, leukocytes, lymphocytes and monocytes and a higher percentage of patients under treatment. Clusters 4 and 5 had higher frequencies of liver impairment and higher medians of reticulocytes, LDH, leukocytes, lymphocytes and monocytes. Hemolysis and inflammation seemed to influence the grouping. Conclusion In our study, cluster analysis showed five groups that exhibited different degrees of inflammation and hemolysis. When comparing clinical data, the result was different only for the criteria of liver abnormality.

Platelet antibodies identification: comparison between two laboratory tests

ABSTRACT Introduction: Platelet antibody identification is indispensable for diagnosing the human platelet antigen (HPA) or human leukocyte antigen (HLA) immunization, mostly because it can restrict the compatibility and results of transfusions. Correct detection of these antibodies is of utmost importance for the diagnosis and treatment. Method: We present 16 platelet alloimmunization results, comparing two tests with different technologies: the MAIPA (monoclonal antibody immobilization of platelet antigens), as a reference technique, and a bead-based assay, the Pak-Lx. Results: Eleven samples (68.75%) showed agreement in both techniques. Two tests were false negatives in the Pak-Lx: a pan-reactivity in GPIIbIIIa and an anti-HPA-9b. On the other hand, the Pak-Lx was more sensitive to detect a decreasing anti-HPA-5b. The Pak-Lx found an anti-HPA-2b positive, but with a low median fluorescent intensity (MFI), suggesting a false-positive result. Moreover, in one case, the MAIPA was negative for a positive Pak-Lx HLA. Conclusion: Antibody platelet diagnosis can sometimes be challenging. The methods seemed similar, the Pak-Lx being faster and simpler than the MAIPA, and they can be complementary to solve clinical issues.

Canine gastrointestinal pythiosis: a case report in Brazilian Pantanal from a diagnostic approach / Pitiose gastrointestinal canina: relato de caso no Pantanal brasileiro a partir de uma abordagem diagnóstica

Pythiosis is caused by an aquatic fungus-like organism (Pythium insidiosum). It is considered an important public health issue as it can affect both animals and humans. This paper reports a case of gastrointestinal pythiosis in a dog. The patient was hospitalized for four days, during which the animal received supportive and symptomatic treatment. But the applied treatment was unsuccessful and the dog's clinical condition worsened, culminating in death. Complementary imaging tests such as radiography and ultrasonography, as well as hematological tests, were performed during the hospitalization period. The definitive diagnosis was reached in the postmortem as macroscopic and microscopic characteristics suggested the presence of intestinal granuloma and accentuated multifocal suppurative necrotic enteritis. Additionally, the histological evaluation revealed morphological structures compatible with P. insidiosum. Also, the results of nested PCR performed showed partial amplification (105 bp) of the ITS1 region of the ribosomal gene of P. insidiosum.(AU)

A pitiose é causada por um organismo aquático semelhante a um fungo (Pythium insidiosum) e considerada um importante problema de saúde pública, pois pode afetar animais e humanos. Este artigo relata um caso de pitiose gastrointestinal em um cão. O paciente ficou internado por quatro dias, período em que o animal recebeu tratamento de suporte e sintomático. No entanto, o tratamento aplicado não teve sucesso e o quadro clínico do cão piorou, culminando com a morte. Exames de imagem complementares, como radiografia e ultrassonografia, bem como exames hematológicos, foram realizados durante o período de internação. O diagnóstico definitivo foi feito na autópsia, pois as características macroscópicas e microscópicas sugeriam a presença de granuloma intestinal e acentuada enterite necrótica multifocal supurativa. Além disso, a avaliação histológica revelou estruturas morfológicas compatíveis com P. insidiosum. Além disso, a nested PCR foi realizada e mostrou amplificação parcial (105 pb) da região ITS1 do gene ribossomal de P. insidiosum.(AU)

Persistent SARS-CoV-2 antigen presence in multiple organs of a naturally infected cat from Brazil

Background: Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) is the etiological agent of the disease coronavirus 2019 (COVID-19) in humans. SARS-CoV-2 has been identified in cats with or without clinical signs. Case presentation: We describe the pathological and molecular findings in a six-month-old asymptomatic cat with SARS-CoV-2 infection from Brazil, belonging to a human family with COVID-19 cases. The pool of nasopharynx and oropharynx swabs at day zero tested positive by RT-qPCR for SARS-CoV-2. No amplification resulted from molecular testing performed on days 7 and 14. The cat was hit by a car and died 43 days after the molecular diagnosis. Immunohistochemistry at post-mortem examination demonstrated nucleocapsid protein in samples from the lungs, kidneys, nasal conchae, trachea, intestine, brain and spleen. Conclusion: The present study has highlighted the possibility that viral antigens can be detected by immunohistochemistry in multiple organs six weeks after infection, although the same tissues tested negative by RT-PCR.(AU)

Persistent SARS-CoV-2 antigen presence in multiple organs of a naturally infected cat from Brazil

Abstract Background: Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) is the etiological agent of the disease coronavirus 2019 (COVID-19) in humans. SARS-CoV-2 has been identified in cats with or without clinical signs. Case presentation: We describe the pathological and molecular findings in a six-month-old asymptomatic cat with SARS-CoV-2 infection from Brazil, belonging to a human family with COVID-19 cases. The pool of nasopharynx and oropharynx swabs at day zero tested positive by RT-qPCR for SARS-CoV-2. No amplification resulted from molecular testing performed on days 7 and 14. The cat was hit by a car and died 43 days after the molecular diagnosis. Immunohistochemistry at post-mortem examination demonstrated nucleocapsid protein in samples from the lungs, kidneys, nasal conchae, trachea, intestine, brain and spleen. Conclusion: The present study has highlighted the possibility that viral antigens can be detected by immunohistochemistry in multiple organs six weeks after infection, although the same tissues tested negative by RT-PCR.

Molecular detection of Brucella abortus in wild and captive felids

Abstract Purpose Brucellosis is a zoonotic disease of great public health importance. In wild animals, Brucella abortus is one of the most diagnosed species, mainly in enzootic environments where domestic animals share the same environment. B. abortus is common in environments shared by cattle, wild, and domestic animals. This study aimed to detect the presence of B. abortus DNA in free-ranging and captivity felids at Mato Grosso State, Brazil. Method Polymerase chain reaction, based on the genetic element IS711, was performed in blood samples collected from 23 free-ranging and captive felids. The species represented include Leopardus colocolo, Leopardus pardalis, Leopardus wiedii, Panthera onca, Puma concolor, and Puma yagouaroundi. Results DNA amplification of B. abortus was observed in only one captive P. concolor (4.34%). Conclusion The detection of this pathogen in captive animals using molecular tools demonstrates the importance of monitoring, as it raises concerns about the possibility of transmission between humans and wild and domestic animals, especially in regions of vast biodiversity, such as in the State of Mato Grosso, Brazil.

Post mortem protozoan hemoparasites detection in wild mammals from Mato Grosso state, Midwestern Brazil / Detecção post mortem de hemoparasitas protozoários em mamíferos selvagens do estado de Mato Grosso, Centro-Oeste do Brasil

Abstract To a better insight into the epidemiology and genetic diversity of protozoan hemoparasites infections in wild mammals, this study aimed to the post mortem detection of DNA from species of the order Piroplasmida (Babesia sp., Cytauxzoon sp., and Theileria sp.) and suborder Adelorina (Hepatozoon sp.) using polymerase chain reaction based on the 18S rRNA gene followed by genetic sequencing of blood and spleen samples collected from carcasses of 164 free-ranging and captive wild mammals from Mato Grosso state. Among them, one Leopardus pardalis, three Panthera onca, two Puma concolor were positive for Cytauxzoon sp., and six Tapirus terrestris tested positive for Piroplasmida, while one L. pardalis was positive for Hepatozoon sp. Furthermore, an uncharacterized piroplasmid genetically related to Theileria sp. previously detected in cats from Brazil was described in lowland tapirs. Despite the controversy regarding the epidemiological threat of these protozoa, the detection of these tick-borne agents in wild free-living and captive mammals, even when asymptomatic, demonstrates the importance of monitoring, particularly in hotspots such as the state of Mato Grosso, to verify the circulation and genetic diversity, to anticipate the possible emergence of diseases, and even their consequences to other animals as well as humans.

Resumo Para uma melhor compreensão da epidemiologia e diversidade genética das infecções por hemoprotozoários em mamíferos selvagens, este estudo teve como objetivo a detecção post mortem de DNA de espécies da ordem Piroplasmida (Babesia sp., Cytauxzoon sp. e Theileria sp.) e subordem Adelorina (Hepatozoon sp.), utilizando-se a reação em cadeia pela polimerase, baseada no gene 18S rRNA, seguido de sequenciamento genético de amostras de sangue e baço, coletadas de 164 carcaças de mamíferos selvagens de vida livre e cativos do estado de Mato Grosso. Entre eles, um Leopardus pardalis, três Panthera onca, dois Puma concolor foram positivos para Cytauxzoon sp., e seis Tapirus terrestris testaram positivos para Piroplasmida, enquanto um L. pardalis foi positivo para Hepatozoon sp. Além disso, foi descrito em antas, um piroplasmídeo não caracterizado geneticamente, relacionado à Theileria sp., previamente detectado em gatos do Brasil. Apesar da controvérsia quanto à ameaça epidemiológica desses protozoários, a detecção desses agentes em mamíferos silvestres e cativos, mesmo quando assintomáticos, demonstra a importância do monitoramento, principalmente em hotspots, como no estado de Mato Grosso, para verificar a circulação e a diversidade genética, a fim de antecipar o possível surgimento de doenças e, até mesmo, suas consequências para outros animais, bem como os humanos.

Granulomatous pneumonia due to pythiosis in captive South American coatis (Nasua nasua) / Pneumonia granulomatosa decorrente de pitiose em quatis sul-americanos (Nasua nasua) de cativeiro

Pythiosis is an emerging infectious disease affecting captive and free-ranging wild animals. We report granulomatous pneumonia due to Pythium insidiosum in two South American coatis (Nasua nasua), who were found dead without any clinical records. Severe granulomatous pneumonia associated with pleural effusion was revealed in the necropsy. Microscopically, variably sized granulomas and pyogranulomas presented negative hyphae profiles at the periphery of their necrotic cores. Grocott methenamine silver stain highlighted these structures, and immunostain (anti- P. insidiosum) was strongly positive. Molecular analysis by polymerase chain reaction amplified P. insidiosum specific DNA. These findings characterized P. insidiosum as a cause of granulomatous pneumonia in coatis and proved that pythiosis needs to be considered in the differential diagnosis of respiratory diseases affecting this species in endemic areas.(AU)

A pitiose é uma doença infecciosa emergente que afeta animais silvestres de cativeiro e em vida livre. Reportamos dois casos de pneumonia granulomatosa decorrentes da infecção por Pythium Insidiosum em quatis sul-americanos (Nasua nasua), que foram encontrados mortos sem apresentar nenhum quadro clínico prévio. Pneumonia granulomatosa severa associada a efusão pleural foi observada durante a necropsia. Na microscopia, foram observados múltiplos granulomas e piogranulomas de tamanhos variados que continham imagens negativas de hifas na periferia de seus centros necróticos. A coloração de metenamina de prata (Grocott) evidenciou estas estruturas, e a imunomarcação (anti-P. insidiosum) foi fortemente positiva. A análise molecular pela reação de polimerase em cadeia amplificou o DNA específico do P. insidiousum. Estes achados caracterizaram o P. insidiosum como a causa da pneumonia granulomatosa nos quatis e provou que a pitiose deve ser considerada um diagnostico diferencial para outras doenças respiratórias que afetam esta espécie.(AU)

Molecular prevalence and factors associated with Babesia vogeli infection in dogs in the Cerrado Mato-Grossense region of Brazil / Prevalência molecular e fatores associados à infecção por Babesia vogeli em cães do cerrado Mato-Grossense

ABSTRACT: Canine babesiosis is a common haemoparasitosis in Brazil. Caused by parasites of the genus Babesia, it is transmitted by ixodid ticks and affects domestic and wild canids. The objective of this study was to verify the prevalence of Babesia species (spp.) using molecular methods in dogs living in urban and rural areas of Cuiabá, Mato Grosso State, Brazil, and to identify the main factors associated with infection. A total of 407 samples from 407 dogs were evaluated using a polymerase chain reaction (PCR) technique, among which Babesia species (spp.) was amplified in 10 (2.5%). Although, no statistical association was found among the variables studied (p>0.05), greater positivity was observed in dogs<1 year of age, male sex, those with free access to the street, and the presence of ticks. PCR samples positive for Babesia spp. were submitted to sequencing and compared in GenBank and exhibited a high degree of similarity with Babesia vogeli sequences.

RESUMO: Babesiose canina é uma hemoparasitose comum no Brasil. Causada por parasitos do gênero Babesia, é transmitida por carrapatos ixodídeos e acomete canídeos domésticos e silvestres. O objetivo deste trabalho foi verificar a prevalência molecular da infecção por Babesia spp. em cães residentes em áreas urbanas e rurais do município de Cuiabá, estado de Mato Grosso, Brasil, e relacionar os principais fatores associados à infecção. Para a pesquisa foram avaliados 407 cães usando a PCR. Das 407 amostras analisadas, 10 (2,5%) amplificaram DNA de Babesia spp. Não foi observada associação estatística entre as variáveis pesquisadas (p>0,05), porém observou-se maior positividade em cães com idade inferior a um ano, machos, com livre acesso à rua e com a presença de carrapatos. Amostras positivas nas PCRs para Babesia spp. foram submetidas a sequenciamento e comparadas no GenBank, mostrando alto grau de similaridade com as sequências de B. vogeli.

Clinical-dermatological, histological abnormalities and prevalence of Trypanosoma caninum and Leishmania infantum in dogs from Midwest region of Brazil / Anormalidades clínico-dermatológicas, histológicas e prevalência de Trypanosoma caninum e Leishmania infantum em cães da região Centro-Oeste do Brasil

Abstract Leishmania infantum is a trypanosomatid that causes parasitic dermatopathy in dogs. Trypanosoma caninum is another trypanosomatid, which infects the skin of dogs, although cutaneous abnormalities are absent. This study aimed to investigate the occurrence of T. caninum infection and its associated cutaneous and histological changes and compare it with the occurrence of L. infantum infection in dogs. The study included 150 dogs, of which T. caninum infection was identified in 3 (2%) and L. infantum infection in 15 (10%) of them, with no association (p>0.05) of these infections with the breed, gender, age, or cutaneous abnormalities. The cutaneous abnormalities were based on 1 (4.8%) and 12 (57.1%) dogs infected by T. caninum and L. infantum, respectively. The dermatohistopathological abnormalities in the dogs infected with T. caninum included mild perivascular lymphohistioplasmacytic infiltrates in the clinically asymptomatic ones, while in those with dermatological abnormalities, acanthosis, epidermal orthokeratotic hyperkeratosis, melanomacrophages, and co-infection with Microsporum sp. and Trichophyton sp. were observed. InL. infantum infected, the histopathological findings included chronic granulomatous inflammatory infiltrates and structures compatible with amastigotes. Despite the low frequency of T. caninum infection, our findings suggest that this trypanosomatid, unlike L. infantum, does not cause any macroscopic skin abnormalities.

Resumo Leishmania infantum é um tripanosomatídeo que causa dermatopatia parasitária em cães. Trypanosoma caninum é outro tripanosomatídeo, que infecta a pele de cães, embora anormalidades cutâneas sejam ausentes. Este estudo teve como objetivo investigar a ocorrência da infecção por T. caninum e suas alterações cutâneas e histológicas associadas e compará-las com a ocorrência da infecção por L. infantum em cães. O estudo incluiu 150 cães, dos quais a infecção por T. caninum foi identificada em 3 (2%) e a infecção por L. infantum em 15 (10%) deles, sem associação (p>0,05) dessas infecções com a raça, sexo, idade ou anormalidades cutâneas. As alterações cutâneas foram observadas em 1 (4,8%) e 12 (57,1%) cães infectados por T. caninum e L. infantum, respectivamente. As anormalidades dermato-histopatológicas nos cães infectados por T. caninum incluíram infiltrados linfo-histioplasmocitários perivasculares leves nos clinicamente assintomáticos, enquanto naqueles com anormalidades dermatológicas, foram observados acantose, hiperqueratose ortoqueratótica epidermal e melanomacrófagos e co-infecção por Microsporum sp. e Trichophyton sp. Nos cães infectados por L. infantum, os achados histopatológicos incluíram infiltrados inflamatórios granulomatosos crônicos e estruturas compatíveis com amastigotas. A despeito da baixa frequência da infecção por T. caninum, nossos achados sugerem que esse tripanosomatídeo, diferentemente de L. infantum, não causa anormalidades macroscópicas na pele.

Vancomycin susceptibility profiles of Staphylococcus spp. isolates from domestic and wild animals / Perfil de suscetibilidade à Vancomicina de isolados de Staphylococcus spp. de animais domésticos e silvestres

ABSTRACT: Staphylococcus spp. are bacteria involved in human and animal infections. They are resistant to antimicrobials and have become a major public health concern. In recent years, there has been a significant increase in methicillin-resistant Staphylococcus strains and vancomycin is the drug of choice for the treatment of such isolates. However, the minimum inhibitory concentration (MIC) of vancomycin ​​necessary to combat this microorganism has been showing an increase. The aim of the present study was to determine the susceptibility profile of the Staphylococcus spp. of domestic and wild animals to vancomycin, using the microdilution in broth and E-test® techniques, as well as comparing the results of both tests. Of the 50 isolates tested, 47 (94 %) were sensitive to vancomycin in the microdilution and 43 (86 %) were sensitive to vancomycin in the E-test®. Seven (14 %) isolates had an intermediate result showing a risk to public health since the detection of these isolates may precede the occurrence of isolates resistant to vancomycin. In addition, the mecA gene was detected in 78 % of the tested samples. Six of the seven isolates with intermediate resistance to vancomycin were carriers of the mecA gene, showing that these isolates had a potential risk of becoming resistant. Thus, control measures must be taken to prevent the spread of these isolates with intermediate resistance and preserve the effectiveness of this antimicrobial for the treatment of infections caused by multiresistant Staphylococcus spp.

RESUMO: Staphylococcus spp. são bactérias envolvidas em infecções de humanos e animais, resistentes a antimicrobianos e tem se tornado uma grande preocupação em saúde pública. Nos últimos anos houve um aumento significativo de Staphylococcus resistentes à meticilina e a vancomicina é a droga de escolha para o tratamento desses isolados, porém vem apresentando elevação nos valores de Concentração Inibitória Mínima (CIM) necessários para combater este microrganismo. O objetivo do presente trabalho foi determinar o perfil de suscetibilidade à vancomicina para isolados de Staphylococcus spp. de animais domésticos e silvestres pelas técnicas de Microdiluição em caldo e E-test®, bem como comparar os resultados de ambos os testes. Dos 50 isolados testados 47 (94%) foram sensíveis à vancomicina na Microdiluição e 43 (86%) foram sensíveis à vancomicina no E-test®. Sete (14%) isolados tiveram resultado intermediário demonstrando um risco à saúde pública visto que a detecção destes isolados pode preceder a ocorrência de isolados resistentes à vancomicina. Ademais o gene mecA foi detectado em 78% das amostras testadas, sendo que dos sete isolados com resistência intermediária à vancomicina, seis eram portadores do gene mecA, evidenciando que esses isolados possuem potencial risco de se tornarem resistentes. Dessa forma medidas de controle devem ser tomadas para evitar a propagação destes isolados com resistência intermediária e preservar a eficácia deste antimicrobiano para o tratamento de infecções causadas por Staphylococcus multirresitentes.

Detection of Toxoplasma gondii infection in feral wild boars (Sus scrofa) through indirect hemagglutination and PCR / Detecção de infecção por Toxoplasma gondii através da hemaglutinação indireta e PCR em javalis (Sus scrofa) de vida livre

ABSTRACT: Wild boars (Sus scrofa) have become an important invasive species in all Brazilian regions. Increase in their population causes damage to rural properties, as they invade and destroy crops. To protect their crops and farm animals, producers hunt wild boars and often consume the product without any sanitary control, becoming exposed to various types of pathogens, including Toxoplasma gondii. Sanitary evaluations of these animals are scarce, especially in relation to the protozoan T. gondii. This study aimed to evaluate the occurrence of this pathogen in wild boars in Brazil. We analyzed 122 blood samples from wild boars (blood clots and serum), collected between 2014 and 2016 in five Brazilian states, using polymerase chain reaction (PCR) and indirect hemagglutination (IH) techniques. In total, 33 (27%) samples were positive by at least one test, 16 (13.1%) were positive by PCR, 19 (15.6%) were positive by IH, and only 2 (1.6%) were positive by both tests. The lack of sanitary management of feral animals increases the incidence of infections, and the consumption of raw or inadequately cooked meat may become a potential source of infection for humans in Brazil.

RESUMO: Os javalis (Sus scrofa) tornaram-se uma importante espécie invasora em todas as regiões do Brasil. Com o aumento de sua população causam danos em propriedades rurais, invadindo e destruindo lavouras. Como alternativa para proteger suas culturas e criações, os produtores os caçam e muitas vezes consomem o produto sem qualquer tipo de controle sanitário, expondo esses consumidores a diversos tipos de patógenos, entre eles o Toxoplasma gondii. Avaliações sanitárias destes animais são escassas, principalmente, em relação ao protozoário T. gondii. Este trabalho teve como objetivo avaliar a ocorrência deste patógeno em javalis de vida livre no Brasil. Foram analisadas 122 amostras de sangue de javalis (coágulos sanguíneos e soro), coletadas entre os anos de 2014 a 2016, de cinco estados do Brasil, através da técnica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e da técnica de hemaglutinação indireta (HI). No total, 33 (27%) amostras foram positivas em pelo menos um teste, sendo 16 (13,1%) na PCR e 19 (15,6%) na IH e apenas 2 (1,6%) em ambos os testes. A falta de manejo sanitário dos animais ferais aumenta a incidência de possíveis infecções e o consumo da carne crua ou sem cocção adequada pode vir a ser potencial fonte de infecção para humanos.

Feline subcutaneous pythiosis / Pitiose subcutânea em um felino

ABSTRACT: Pythiosis in felines is a rare disease associated with the oomycete Pythium insidiosum. The aim of this report was to describe the macroscopic, histopathological, and molecular characteristics of P. insidiosum infection in a 2-year-old cat, with a localized invasive subcutaneous mass. The feline had an increase of volume near the anal region since it was younger. The cat died just after surgery. The necropsy was performed, and samples were collected for histopathological examination. Microscopically, the skin lesion was characterized by necro-eosinophilic dermatitis, panniculitis, and myositis surrounding negatively stained hyphal structures. In the sections stained with GMS, dark brown hyphae were clearly seen inside the affected tissue. They were rarely septate and their walls were almost parallel. Immunohistochemistry using a polyclonal anti-P. insidiosum antibody showed a strongly immunostained hyphae into the lesions. The analysis based on PCR had a positive result for P. insidiosum. Pythiosis should be considered in the differential diagnosis of subcutaneous tissue disorders in felines.

RESUMO: Pitiose em felinos é uma doença de ocorrência rara associada ao oomiceto Pythium insidiosum. O objetivo deste relato é descrever as características macroscópicas, histopatológicas e moleculares da infecção por P. insidiosum em um gato de dois anos de idade, com uma massa invasiva localizada no subcutâneo. O gato morreu logo após a cirurgia, sendo realizada a necropsia e coleta de amostras para exame histopatológico. Microscopicamente, a lesão cutânea foi caracterizada por dermatite necroeosinofílica, paniculite e miosite envolvendo imagens de hifas negativamente coradas. Nas seções coradas com GMS, hifas marrom-escuras foram claramente vistas dentro do tecido afetado. As hifas raramente eram septadas e suas paredes eram quase paralelas. A imuno-histoquímica, utilizando um anticorpo policlonal anti-P. insidiosum, mostrou hifas fortemente imunomarcadas nas lesões. A análise baseada em PCR teve resultado positivo para P. insidiosum. A pitiose deve ser considerada no diagnóstico diferencial de desordens teciduais subcutâneas em felinos.

Allele and haplotype frequencies of human platelet and leukocyte antigens in platelet donors / Frequência alélica e haplotípica dos antígenos plaquetários e leucocitários humanos em doadores de plaquetas

ABSTRACT Objective To described the allele and haplotype frequencies of human leukocyte antigen genes at the -A, -B loci and human platelet antigen genes for human platelet antigen systems 1 to 9, 11 and 15 in blood. Methods We included 867 healthy unrelated volunteer donors who donated platelets between January 2011 and December 2014. Microarray genotyping was performed using a BeadChip microarray. Medium resolution typing of the human leukocyte antigen at loci A and B was carried out using sequence-specific oligonucleotide probe hybridization. We used multivariate analysis and our human leukocyte antigen population was compared to data from the United States national bone marrow donor program. Human platelet antigen results were compared to a literature review and data from around the world. Results Our human leukocyte antigen haplotype results were more similar to those of hispanics, followed by caucasians. Likewise, our human platelet antigen sample is more similar to those of Argentina, Rio Grande do Sul and Italy. Conclusion This was the first article that discusses human platelet antigen and human leukocyte antigen data together. Rare genotypes or antibody associations can make patient management difficult. A blood bank with genotyped donors allows for optimal transfusion and can contribute to better results. Our information can serve as basis for a database of platelet antigen polymorphisms.

RESUMO Objetivo Descrever as frequências alélicas e haplotípicas de genes dos antígenos leucocitários humanos nos loci -A,- B e dos antígenos plaquetários humanos para os sistemas HPA-1 a 9, 11 e 15. Métodos Foram incluídos 867 doadores voluntários, saudáveis, não relacionados, que doaram plaquetas por aférese entre janeiro de 2011 e dezembro de 2014. A genotipagem foi realizada usando microarray BeadChip. A tipificação de resolução intermediária dos antígenos leucocitários humanos loci A e B foi realizada por meio de hibridização com sonda para oligonucleotídeos por sequência específica. Utilizamos análises multivariadas e o antígeno leucocitário humano de nossa população foi comparado com a do programa nacional de doadores de medula óssea norte-americano. Já os resultados dos antígenos plaquetários humanos foram comparados à revisão da literatura e a dados de populações de outros países. Resultados Os resultados do haplótipo de antígenos leucocitários humanos são mais parecidos com os dos hispânicos, seguidos dos caucasianos. Igualmente, a amostra de antígenos plaquetários humanos foi mais semelhante às da Argentina, do Rio Grande do Sul e da Itália. Conclusão Este foi o primeiro artigo a discutir antígenos plaquetários e leucocitários humanos simultaneamente. Genótipos raros ou associações de anticorpos podem dificultar o manejo clínico do paciente. Um banco de sangue com doadores genotipados permite um melhor resultado e transfusão possíveis. Estas informações podem servir de base para um banco de dados sobre polimorfismos de antígenos plaquetários.

Genetic diversity and molecular survey of Trypanosoma (Megatrypanum ) theileri in cattle in Brazil's western Amazon region / Diversidade genética e levantamento molecular de Trypanosoma (Megatrypanum) theileri em bovinos na região da Amazônia Ocidental do Brasil

Abstract Trypanosoma (Megatrypanum) theileri is a flagellated protozoan that infects ruminants and it displays high genetic diversity. In this study, we investigated the prevalence rates of this protozoan based on hemoculture and molecular diagnosis. The isolates of T. theileri thus obtained were characterized by molecular markers SSU rDNA and gGAPDH and molecular diagnosis based on Cathepsin L-like gene (PCR-TthCATL). The PCR-TthCATL and hemoculture indicated an overall prevalence rate of 8.13%, and the CATL derived sequence named IB was identified for the first time in cattle in the western Amazon region, as well as IF in Brazil. We also describe a possible new PCR-TthCATL derived sequence in cattle, designated IL.

Resumo Trypanosoma (Megatrypanum) theileri é um protozoário flagelado que infecta ruminantes e apresenta alta diversidade genética. Neste estudo, investigamos as taxas de prevalência deste protozoário com base na hemocultura e no diagnóstico molecular. Os isolados de T . theileri obtidos foram caracterizados pelos marcadores moleculares SSU rDNA e gGAPDH e o diagnóstico molecular foi baseado no gene do tipo Catepsina L (PCR-TthCATL). O PCR-TthCATL e a hemocultura indicaram uma taxa de prevalência total de 8,13% e a sequência derivada do gene Catepsina L denominada IB de T. theileri foi identificada pela primeira vez em bovinos da Amazônia Ocidental, bem como a IF no Brasil. Também descrevemos uma possível nova sequência derivada da PCR-TthCATL em bovinos, designada IL.

Molecular survey and genetic diversity of piroplasmids in equids from Midwestern Brazil / Levantamento molecular e diversidade genética de piroplasmídeos em equídeos do Centro-Oeste do Brasil

Abstract We evaluated the distribution of piroplasmids in equids from the Mato Grosso state in Midwestern Brazil using molecular methods and the interspecific genetic diversity. For this, 1,624 blood samples of equids from 973 farms were examined by PCR, using primer pairs that amplify a fragment of the genes rap-1 and ema-1 of Babesia caballi and Theileria equi, respectively. For molecular characterization and phylogenetic studies, 13 and 60 sequences of the rap-1 and ema-1 genes, respectively, were used to build a dendogram using maximum parsimony. B. caballi and T. equi were detected in 4.11% and 28.16% of the farms, respectively, and molecular prevalence was 2.74% for B. caballi and 25.91% for T. equi. The location of the farms and animals raised in the Pantanal ecoregion influence the probability of equids testing positive for B. caballi and T. equi . Moreover, age and herd purpose were variables significantly associated with T . equi infection. The sequences of B. caballi presented 1.95% intraspecific variability, contrasting with 2.99% in T. equi. Dendrograms for both species demonstrated the presence of subgroups with high values of support of branches. However, it is not possible to associate these groups with geographic origin and/or ecoregion.

Resumo Foi avaliada a distribuição de piroplasmídeos em equídeos do Estado de Mato Grosso, no Centro-Oeste do Brasil, utilizando-se métodos moleculares e a diversidade genética interespecífica. Para isso, 1.624 amostras de sangue de equídeos de 973 fazendas foram examinadas pela PCR, usando pares de oligonucleotídeos que amplificam um fragmento dos genes rap-1and ema-1 de Babesia caballi e Theileria equi, respectivamente. Para caracterização molecular e estudos filogenéticos, foram utilizadas 13 e 60 sequências dos genes rap-1 e ema-1, respectivamente, para construção de um dendograma utilizando máxima parcimônia. B. caballi e T . equi foram detectados em 4,11% e 28,16% das fazendas, respectivamente, e a prevalência molecular foi de 2,74% para B. caballi e 25,91% para T. equi. A localização das fazendas e animais criados na ecorregião do Pantanal influenciam a probabilidade de equídeos serem positivos para B. caballi e T. equi. Além disso, idade e propósito do rebanho foram variáveis, significativamente, associadas à infecção por T. equi. As sequências de B . caballi apresentaram variabilidade intraespecífica de 1,95%, contrastando com 2,99% em T. equi. Dendrogramas para ambas as espécies demonstraram a presença de subgrupos com altos valores de sustentação dos ramos. No entanto, não é possível associar esses grupos com origem geográfica e/ou ecorregião.

Outbreak of neonatal diarrhea caused by multiple genotypes of rotavirus A in a beef calves herd / Surto de diarreia neonatal por múltiplos genótipos de rotavírus A em um rebanho de bovinos de corte

Calf diarrhea causes substantial economic losses to beef cattle production worldwide. It is a complex multifactorial pathological condition influenced by infectious, nutritional and environmental factors. The present study focused on analyzing the pathological and molecular characterization of bovine rotavirus A (BoRVA) during a diarrhea outbreak in a beef cattle herd located in the state of Mato Grosso, central-western region, Brazil. The outbreak caused high morbidity (80%) and mortality (12%) among 1,100 calves up to 30 days of age. The BoRVA was identified in 53.3% (16/30) of the diarrheic fecal samples analyzed using the silver-stained polyacrylamide gel electrophoresis (ss-PAGE) technique. The nucleotide sequence analysis of VP7 (G genotype) and VP4 (P genotype) via RT-PCR from eight BoRVA-positive fecal samples showed the genotypes G6P[5] (n = 6), G6P[11] (n = 1) and G6P[X] (n = 1). Three calves were necropsied and the gross findings included edema and thickened, wrinkled bowel mucosa in the small intestine. Microscopic lesions were confined to the villi of the small intestine, characterized mainly by villus fusion and moderate multifocal lymphoplasmacytic enteritis. Immunohistochemical examination of three cases was positive for BoRVA. The 53.3% of the diarrheic fecal samples that were positive for BoRVA in this study suggested that RV was the etiological agent involved in this neonatal calf diarrhea outbreak.(AU)

A diarreia neonatal provoca perdas econômicas substanciais na produção de bovinos em todo o mundo. É uma condição patológica multifatorial complexa influenciada por fatores infecciosos, nutricionais e ambientais. O presente estudo teve por objetivo caracterizar o rotavírus tipo A (BoRVA) através da análise patológica e molecular durante um surto de diarreia em um rebanho bovino localizado no estado de Mato Grosso, região centro-oeste, no Brasil. O surto causou alta morbidade (80%) e letalidade (12%) em um rebanho composto 1.100 bezerros até 30 dias de idade. O BoRVA foi identificado em 53,3% (16/30) das amostras fecais diarreicas analisadas usando a técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida corada com prata (ss-PAGE). A análise da sequência nucleotídica de VP7 (genótipo G) e VP4 (genótipo P) via RT-PCR a partir de oito amostras fecais BoRVA-positivas mostrou os genótipos G6P [5] (n = 6), G6P [11] (n = 1) e G6P [X] (n = 1). Três bezerros foram submetidos à necropsia e os achados macroscópicos incluíram edema e espessamento da mucosa do intestino delgado. As lesões microscópicas foram observadas nas vilosidades do intestino delgado, sendo caracterizadas principalmente por fusiosamento de vilosidades e enterite linfoplasmocitária multifocal moderada. O exame imunohistoquímico dos três casos foram positivos para o BoRVA. As 53,3% das amostras fecais diarreicas positivas para o BoRVA sugeriram que o rotavírus é o agente etiológico envolvido neste surto de diarreia neonatal em bezerros.(AU)